2024 年 2 月 16 日，美国 FDA 批准了首个肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL) 细胞治疗药物。这一突破为无法切除或转移性黑色素瘤患者提供了一种治疗选择。与主要用于血癌的 CAR-T 疗法不同，TIL 疗法旨在针对实体肿瘤。虽然这一进步前景广阔，但生产用于临床试验的 TIL 疗法面临着一些挑战。本文探讨了生产过程中的关键障碍和潜在解决方案。

生产时间表和工艺中的挑战

生产 TIL 细胞疗法所需的时间差异很大，从三周到几个月不等，具体取决于 TIL 是否经过修饰。相比之下，CAR-T 疗法的时间表更可预测，约为两到三周。TIL 和 CAR-T 疗法之间的根本区别在于 T 细胞的收集和处理方式。对于 TIL 疗法，T 细胞直接从患者的实体瘤中提取，需要一个复杂的过程，包括肿瘤消化、碎裂、悬浮、刺激和扩增。相比之下，CAR-T 疗法通过血液分离术收集 T 细胞，然后进行修饰、刺激和扩增。

有几个因素可能会延迟生产过程，但有一些策略可以减轻这些风险：

• 肿瘤样本质量：如果肿瘤样本太小或坏死，则存活淋巴细胞数量可能不足。优化肿瘤切除技术和选择肿瘤负荷高的患者有助于确保有足够数量的功能性TIL。

• 细胞扩增：临床剂量的TIL治疗需要超过10^9个细胞。细胞因子混合物（例如IL-2）和饲养细胞（γ-辐照的PBMC饲养细胞）用于促进TIL增殖。

• 污染风险：在肿瘤切除和生产过程中，保持无菌状态至关重要。GMP 级设施和自动化封闭系统有助于最大限度地减少人为错误和污染风险。

• 供应链限制： TIL      疗法针对特定患者，因此生产取决于 GMP 设施产能以及培养基和 IL-2 等必需品的供应。分散 TIL 生产可能有助于克服这些挑战。

冷冻保存的作用及其对TIL功能的影响

冷冻保存是 TIL 生产过程中必不可少的一步，可以在输注前储存和运输细胞。然而，它带来了几个挑战：

• 细胞活力和恢复：冷冻和解冻会损坏细胞，导致活力降低。使用二甲基亚砜等冷冻保护剂以及控速冷冻和快速解冻技术有助于保持细胞完整性。

• 增殖能力：冷冻保存的TIL通常表现出扩增潜力降低。可以使用IL-2等细胞因子来恢复其生长能力。

• 新鲜肿瘤组织保存：如果 TIL 生产不是在现场进行，则可能需要冷冻保存肿瘤样本以维持细胞活力。

研究表明，冷冻保存不会显著影响 TIL 活力、功能或功效：

• 新鲜和解冻的 TIL      样本均保持 86% 以上的活力。

• 一项临床研究发现，冷冻保存的 TIL 疗法在先前接受过抗 PD-1 治疗的晚期转移性黑色素瘤患者中实现了 38% 的客观缓解率 (ORR) 。

• 对直肠癌肿瘤进行的研究比较了新鲜和冷冻保存的样本，发现关键TIL 亚群的稳定恢复，包括 CD4+ 和 CD8+      细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL)、γδ T 细胞和粘膜相关不变 T 细胞 (MAIT 细胞) 。

标准化放行标准与个性化 TIL 评估

为确保安全性和有效性，TIL 生产涉及过程测试和最终批次放行测试。标准化的标准包括：

• 在线测试：无菌性、肿瘤特异性 T 细胞活化、活力和细胞计数

• 批次放行检测：支原体检测、污染检查、纯度、身份、活力、肿瘤特异性 T 细胞活化和内毒素水平

用于质量控制的主要分析方法包括：

• 流式细胞术：通过      CD45、CD3、CD4 和 CD8 等标记物确认 TIL 身份。如果超过 90% 的细胞为 CD45+ CD3+，则样本被视为可接受。

• 内毒素和纯度测试： Endosafe      测试可确保内毒素水平在可接受的范围内。

• 细胞毒性效力测定： IFN-γ      ELISA 测定测量肿瘤特异性 T 细胞活化，要求最低阈值 >200 pg/ml。评估其他效力标记物，如      LAMP (CD107a) 表达。

虽然标准化测试至关重要，但个性化评估仍然必不可少。TIL 疗法是一种自体治疗，这意味着每位患者的产品在成分和效力上都是独一无二的。例如，单剂量 TIL 细胞数范围从 7.5 x 10^9 到 72 x 10^9，TIL 产品的 CD4/CD8 比率和衰竭标记物也各不相同。由于存在这种差异，因此需要根据具体情况对每一批 TIL 进行评估。

TIL 疗法的监管障碍

与 CAR-T 疗法相比，TIL 疗法因其针对特定患者、生产过程复杂且缺乏基因改造而面临独特的监管挑战。一些关键的监管问题包括：

• 患者特异性差异：由于每一批细胞均来自个体肿瘤，因此细胞产量、扩增率和表型特征可能存在显著差异。相比之下，CAR-T 疗法涉及来自更标准化起始群体的转基因 T 细胞。

• 效力和疗效测量：与针对明确抗原（如 CD19）的 CAR-T 疗法不同，TIL 疗法依赖于天然肿瘤反应，而这种反应因患者而异。每一批 TIL 都需要进行个性化效力测定。

• 生产一致性和可放大性：肿瘤活检的变异性使得标准化 TIL 生产更具挑战性。此外，细胞扩增需要数周至数月的时间，而 CAR-T 生产速度更快，因为它依赖于外周血源细胞。

• 长期安全性和有效性数据： TIL 在体内的持久性较难预测，需要对患者进行长期随访以满足监管要求。

为了解决这些监管障碍，可以实施以下几种策略：

• 开发和标准化可靠的效力测定方法，例如 IFN-γ ELISA，以满足监管期望。

• 优化冷冻保存技术以确保一致的TIL质量和功能。

• 使用人工智能驱动的生物标志物分析来改善患者选择并预测 TIL 疗效。

• 尽早与监管机构合作，建立明确的产品放行和临床终点标准。

结论

TIL 细胞疗法代表了实体肿瘤治疗的重大进步。然而，其成功取决于克服与生产时间表、冷冻保存、产品一致性和监管批准相关的挑战。随着研究和技术的不断发展，创新解决方案将有助于简化 TIL 生产工艺，将这种有希望的疗法带给更多有需要的患者。